calcular el título para un virus es una forma complicada de decir que un científico está contando el número de virus en una muestra en particular. para calcular los títulos de virus, los científicos infectan las placas de bacterias en crecimiento con soluciones virales en concentraciones variables y calculan la cantidad de virus en la solución original contando las bacterias que murieron debido a la infección viral.
diluciones seriales
Póngase los guantes, llene 10 tubos de cultivo con 9 ml de caldo y etiquételos con “10 ^ -1”, “10 ^ -2”, “10 ^ -3”, y así sucesivamente hasta “10 ^ -10”. Estos tubos se utilizará para diluciones seriales virales utilizadas para calcular el título de fagos. Dado que los virus pueden crecer hasta concentraciones increíblemente altas, debe diluirlos para contarlos de manera efectiva. Cada tubo representa una dilución diez veces mayor del virus.
tome 1 ml del cultivo de virus para el que desea calcular el título de fagos y transfiéralo al tubo titulado “10 ^ -1” con una pipeta. Mezclar bien el tubo. Esta es tu primera dilución diez veces.
tome 1 ml del cultivo mixto de su tubo etiquetado como “10 ^ -1” y transfiéralo con una nueva pipeta al siguiente tubo, etiquetado como “10 ^ -2”. mezcle también este tubo.
continuar este patrón para crear una serie de dilución en serie. Terminarás con 9 tubos de 9 ml y 1 tubo de 10 ml. las cargas virales en sus tubos se diluirán desde 10 veces (su primer tubo) o 100 veces (su segundo tubo) hasta diez mil millones de veces (su tubo final).
Preparación de platos para el cálculo del título.
tome 10 tubos de agar suave tryptone y 10 placas petri y etiquételos para que correspondan con sus tubos de dilución en serie.
afloje las tapas para que no se desprendan del calor y luego coloque los tubos de agar en un vaso de agua hirviendo. Esto derretirá el agar para que pueda verterlo en placas de Petri.
transfiera sus tubos a un baño de agua caliente a un mínimo de 45 grados centígrados. esto asegurará que su agar no se solidifique en los tubos antes de que tenga la oportunidad de verterlo en una placa de Petri.
Agregue dos gotas de cultivo bacteriano a su agar y mezcle suavemente. estas son las bacterias que se eliminarán, permitiéndole contar el número de partículas de virus en una solución particular.
agregue 1 ml de cada dilución en serie a su tubo de agar correspondiente mientras los tubos aún están en el baño de agua caliente. por ejemplo, 1 ml de su dilución en serie de 10 ^ -1 debe ir al tubo de agar etiquetado como "10 ^ -1".
mezcle cada tubo y luego vierta cada tubo en la placa de Petri con la etiqueta correspondiente. esto creará una capa delgada de agar que se ha inoculado con bacterias y virus en cada placa. Dejar crecer las placas durante la noche en una incubadora.
contando y calculando el título del virus
saca tus platos de la incubadora y examínalos. Debería ver áreas nubladas a lo largo de la placa donde han crecido las bacterias, a excepción de pequeñas manchas claras llamadas placas. estas placas son parches de bacterias muertas, y cada placa representa un virus.
encuentre una placa que tenga entre 30 y 300 placas y cuente el número exacto de placas en esa placa.
anote la cantidad de placas en su plato y multiplíquelas por 10. si contara 157 placas, obtendría 1570.
multiplique el número que obtuvo en el paso anterior por el inverso del número en su tubo de dilución. por ejemplo, si la placa que seleccionó fue la placa 10 ^ -5, multiplicaría 1570 por 10 ^ 5 para obtener 157000000. este número final es su título de fago y representa el número de virus por ml de su cultivo original.
advertencia
Tenga cuidado al trabajar con virus. No todos los virus son peligrosos, pero debes tomar precauciones. cambia tus guantes a menudo. limpie inmediatamente cualquier derrame y desinfecte el área.