los qu铆micos utilizan cromatograf铆a l铆quida de alto rendimiento, o hplc, para separar mezclas de compuestos. en general, el m茅todo consiste en inyectar una muestra en una columna donde se mezcla con uno o m谩s solventes. diferentes compuestos se adsorben, o "pegan", a la columna en diferentes grados; y cuando el disolvente empuja los compuestos a trav茅s de la columna, uno de los componentes de la mezcla saldr谩 primero de la columna. el instrumento detecta los compuestos a medida que salen de la columna y produce un cromatograma que consiste en una gr谩fica con tiempo de retenci贸n en el eje x e intensidad de se帽al del detector en el eje y. a medida que los compuestos salen de la columna, producen "picos" en el cromatograma. en general, cuanto m谩s separados y m谩s estrechos sean los picos en el cromatograma, mayor ser谩 la resoluci贸n. Los cient铆ficos consideran una resoluci贸n de 1.
mida los anchos de dos picos adyacentes en el cromatograma anotando d贸nde est谩n los valores del eje x en la base de cada pico. el eje x representa el tiempo de retenci贸n, generalmente medido en segundos. por lo tanto, si un pico comienza a los 15.1 segundos y termina a los 18.5 segundos, su ancho es (18.5 - 15.1) = 3.4 segundos.
determine los tiempos de retenci贸n anotando el tiempo, es decir, la ubicaci贸n en el eje x, que corresponde a las ubicaciones de los m谩ximos de los picos. Normalmente, este valor estar谩 aproximadamente a mitad de camino entre los dos valores utilizados para calcular el ancho en el paso 1. El ejemplo dado en el paso 1, por ejemplo, exhibir谩 un m谩ximo de aproximadamente 16.8 segundos.
calcula la resoluci贸n, r, entre dos picos por
r = (rt1 - rt2) / [0.5 * (w1 + w2)],
donde rt1 y rt2 representan los tiempos de retenci贸n de los picos 1 y 2, y w1 y w2 representan los anchos de los picos tomados en sus bases. Continuando con el ejemplo de los pasos 2 y 3, un pico muestra un tiempo de retenci贸n de 16,8 segundos y un ancho de 3,4 segundos. Si el segundo pico exhibi贸 un tiempo de retenci贸n de 21.4 segundos con un ancho de 3.6 segundos, entonces la resoluci贸n ser铆a
r = (21.4 - 16.8) / [0.5 * (3.4 + 3.6)] = 4.6 / 3.5 = 1.3.