El caldo nutritivo l铆quido se usa para cultivar bacterias como la Escherichia coli. Las recetas para este caldo var铆an seg煤n la especie bacteriana y la presencia de modificaciones gen茅ticas, por ejemplo, resistencia a los antibi贸ticos. el caldo se puede solidificar agregando agar, que permite que las bacterias formen colonias distintas, mientras que en cultivo l铆quido simplemente se dispersan en todo el volumen. Esta es una t茅cnica b谩sica pero esencial para m茅todos avanzados, como la clonaci贸n de genes o los ensayos microbiol贸gicos. este art铆culo asume que las cepas est谩ndar de laboratorio de Escherichia coli deben cultivarse en placas de agar (o placas de Petri) en caldo de luria (lb).
pesar 10 gramos de triptonona de calidad bacteriana, 5 gramos de extracto de levadura, 5 gramos de cloruro de sodio, 15 gramos de agar o agarosa y 1 mililitro de hidr贸xido de sodio 1n. mezclarlos con un volumen de agua est茅ril destilada y esterilizada en autoclave hasta obtener 1 litro de medio. Autoclave los medios en frascos o frascos con tapa suelta durante 25 minutos. Deje que se enfr铆e a aproximadamente 50 grados cent铆grados antes de agregar reactivos que se destruir谩n a altas temperaturas, como antibi贸ticos u otros suplementos nutricionales.
Permita que los medios autoclavados se enfr铆en a 50 grados cent铆grados y no menos de 45 grados cent铆grados, ya que el agar se colocar谩 en su recipiente antes de que se pueda verter. obtenga placas de Petri est茅riles y vierta lo suficiente para cubrir toda el 谩rea de la superficie de la placa y al menos la mitad de su profundidad. evite sobrellenar las placas y preferiblemente no permita que el agar entre en contacto con el borde superior del plato. Permita que las placas se solidifiquen en un ambiente est茅ril (por ejemplo, debajo de una campana de flujo laminar) dejando las tapas fuera y en una esquina de la campana.
secar los platos. Aunque las placas se pueden usar tan pronto como se colocan, habr谩 algo de humedad en la superficie del agar, lo que evitar谩 que las colonias bacterianas se adhieran lo suficiente. por lo tanto, es mejor secar las placas antes de aplicar cualquier bacteria, por ejemplo, dej谩ndolas a temperatura ambiente durante unos d铆as o media hora bajo una campana de flujo laminar o en una incubadora a 37 grados cent铆grados.
guardar los platos. las placas secas deben apilarse boca abajo (invertidas) sobre sus tapas y devolverse a su empaque original, cerradas con cinta adhesiva y envueltas en papel de aluminio para protegerlas de la luz o en un recipiente adecuado. siempre escriba la fecha de preparaci贸n en las placas y evite usarlas si las placas tienen m谩s de 2 meses.
propina
lleve a cabo la mayor cantidad posible de los pasos anteriores (preferiblemente todos) dentro de un ambiente est茅ril (por ejemplo, bajo una llama abierta o una campana de flujo laminar) para evitar que los contaminantes bacterianos en el aire entren y crezcan en el medio.