El caldo nutritivo líquido se usa para cultivar bacterias como la Escherichia coli. Las recetas para este caldo varían según la especie bacteriana y la presencia de modificaciones genéticas, por ejemplo, resistencia a los antibióticos. el caldo se puede solidificar agregando agar, que permite que las bacterias formen colonias distintas, mientras que en cultivo líquido simplemente se dispersan en todo el volumen. Esta es una técnica básica pero esencial para métodos avanzados, como la clonación de genes o los ensayos microbiológicos. este artículo asume que las cepas estándar de laboratorio de Escherichia coli deben cultivarse en placas de agar (o placas de Petri) en caldo de luria (lb).
pesar 10 gramos de triptonona de calidad bacteriana, 5 gramos de extracto de levadura, 5 gramos de cloruro de sodio, 15 gramos de agar o agarosa y 1 mililitro de hidróxido de sodio 1n. mezclarlos con un volumen de agua estéril destilada y esterilizada en autoclave hasta obtener 1 litro de medio. Autoclave los medios en frascos o frascos con tapa suelta durante 25 minutos. Deje que se enfríe a aproximadamente 50 grados centígrados antes de agregar reactivos que se destruirán a altas temperaturas, como antibióticos u otros suplementos nutricionales.
Permita que los medios autoclavados se enfríen a 50 grados centígrados y no menos de 45 grados centígrados, ya que el agar se colocará en su recipiente antes de que se pueda verter. obtenga placas de Petri estériles y vierta lo suficiente para cubrir toda el área de la superficie de la placa y al menos la mitad de su profundidad. evite sobrellenar las placas y preferiblemente no permita que el agar entre en contacto con el borde superior del plato. Permita que las placas se solidifiquen en un ambiente estéril (por ejemplo, debajo de una campana de flujo laminar) dejando las tapas fuera y en una esquina de la campana.
secar los platos. Aunque las placas se pueden usar tan pronto como se colocan, habrá algo de humedad en la superficie del agar, lo que evitará que las colonias bacterianas se adhieran lo suficiente. por lo tanto, es mejor secar las placas antes de aplicar cualquier bacteria, por ejemplo, dejándolas a temperatura ambiente durante unos días o media hora bajo una campana de flujo laminar o en una incubadora a 37 grados centígrados.
guardar los platos. las placas secas deben apilarse boca abajo (invertidas) sobre sus tapas y devolverse a su empaque original, cerradas con cinta adhesiva y envueltas en papel de aluminio para protegerlas de la luz o en un recipiente adecuado. siempre escriba la fecha de preparación en las placas y evite usarlas si las placas tienen más de 2 meses.
propina
lleve a cabo la mayor cantidad posible de los pasos anteriores (preferiblemente todos) dentro de un ambiente estéril (por ejemplo, bajo una llama abierta o una campana de flujo laminar) para evitar que los contaminantes bacterianos en el aire entren y crezcan en el medio.