tbe y tae se usan como amortiguadores en biología molecular, principalmente para la electroforesis de ácidos nucleicos. Los tampones tris se usan en condiciones de pH ligeramente básicas, como para la electroforesis de ADN, ya que esto mantiene el ADN soluble en la solución y lo desprotona para que sea atraído hacia el electrodo positivo y migre a través de un gel. edta es un ingrediente en la solución porque este agente quelante común protege los ácidos nucleicos de la degradación por enzimas. El edta quela los cationes divalentes que son cofactores de las nucleasas que pueden contaminar la muestra. sin embargo, dado que el catión de magnesio es un cofactor para la polimerasa de ADN y las enzimas de restricción, la concentración de edta se mantiene deliberadamente baja (alrededor de 1 mm de concentración).
10x tbe materiales tampón de electroforesis
- 108 g de base tris [tris (hidroximetil) aminometano]
- 55 g de ácido bórico
- 7,5 g de edta, sal disódica
- agua desionizada
preparación para el tampón de electroforesis 10x tbe
- disuelva el tris , el ácido bórico y el edta en 800 ml de agua desionizada.
- diluir el tampón a 1 l. Los grumos blancos no disueltos pueden disolverse colocando la botella de solución en un baño de agua caliente. Una barra de agitación magnética puede ayudar al proceso.
No necesita esterilizar la solución. aunque puede ocurrir precipitación después de un lapso de tiempo, la solución madre todavía es utilizable. puede ajustar el ph utilizando un medidor de ph y la adición gota a gota de ácido clorhídrico concentrado (hcl) . está bien almacenar el tampón a temperatura ambiente, aunque es posible que desee filtrar la solución madre a través de un filtro de 0,22 micras para eliminar las partículas que favorecerían la precipitación.
10x tbe de almacenamiento de tampón de electroforesis
Almacene la botella de solución tampón 10x a temperatura ambiente . La refrigeración acelerará la precipitación.
utilizando 10x tbe tampón de electroforesis
La solución se diluye antes de su uso. diluir 100 ml de caldo 10x a 1 l con agua desionizada.
5x tbe receta de solución madre
La ventaja de la solución 5x es que es menos probable que precipite.
- 54 g de base tris (trizma)
- 27,5 gramos de ácido bórico
- 20 ml de solución edta de 0,5 m
- agua desionizada
preparación
- Disuelva la base tris y el ácido bórico en la solución de edta.
- ajustar el ph de la solución a 8.3 usando hcl concentrado.
- diluya la solución con agua desionizada para hacer 1 litro de solución madre 5x. la solución también se puede diluir a 1x o 0.5x para electroforesis.
el uso accidental de una solución de 5x o 10x le dará malos resultados porque se generará la mayor cantidad de calor. Además de darle una resolución deficiente, la muestra puede dañarse.
0.5x tba tampón receta
- 5x tbe solución stock
- agua desionizada destilada
preparación
Añadir 100 ml de la solución 5x tbe a 900 ml de agua destilada desionizada. mezclar bien antes de usar.
limitaciones
Aunque tbe y tae son tampones de electroforesis comunes, existen otras opciones para soluciones conductoras de baja molaridad, incluido el tampón de borato de litio y el tampón de borato de sodio. El problema con tbe y tae es que los amortiguadores basados en tris limitan el campo eléctrico que se puede usar en la electroforesis porque una carga excesiva provoca una temperatura desbocada.