Los bioquímicos y los biólogos moleculares utilizan la electroforesis para separar macromoléculas como las proteínas y los ácidos nucleicos. esto permite a los científicos aislar y analizar proteínas individuales o secuencias de ácidos nucleicos en una mezcla compleja. Un ejemplo típico de electroforesis en el laboratorio es un microbiólogo que utiliza la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para separar fragmentos de ADN producidos en una comunidad microbiana. independientemente del propósito, la electroforesis siempre requiere el uso de una solución tampón.
principios de la electroforesis
La electroforesis separa las moléculas a lo largo de un gradiente según su tamaño, carga u otras propiedades. ese gradiente puede ser un campo eléctrico o, en el caso de electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (dgge), un desnaturalizante como una mezcla de urea y formamida. las proteínas migrarán hacia el ánodo si están cargadas negativamente y el cátodo si están cargadas positivamente. Como las moléculas más grandes migran más lentamente que las más pequeñas, los científicos pueden medir la distancia recorrida y usar logaritmos para determinar el tamaño de los fragmentos.
electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante
Con dgge, el ADN se mueve a lo largo de un gradiente de aumento del poder desnaturalizante hasta que el poder es suficiente para desnaturalizar, o desplegar, ese fragmento de ADN en particular. En este punto, la migración se detiene. Los científicos pueden usar este método para separar fragmentos en función de su susceptibilidad individual a la desnaturalización.
lo que hace el búfer
En el caso de la electroforesis que se separa en función de la carga, los iones en el búfer transmiten la carga necesaria para la separación. El amortiguador, al proporcionar un depósito de ácido y base débiles, también mantiene el ph dentro de un rango estrecho. esto es importante porque la estructura y la carga de una proteína o ácido nucleico cambiarán si se someten a cambios significativos de ph, evitando así una separación adecuada.
buffers típicos
diferentes tampones son ideales para mantener el gel de electroforesis en diferentes rangos de ph deseados. Los tampones típicos utilizados por los científicos para este propósito incluyen ácido acético, ácido bórico, ácido fosfórico y ácido cítrico, así como glicina y taurina. en general, el valor pka (constante de disociación ácida) debe estar cerca del ph requerido. Es preferible a nosotros los búferes que proporcionan una baja magnitud de carga para no conducir demasiada corriente.