dna
Ácido desoxirribonucleico y proteínas. El ADN se organiza en unidades llamadas genes, cada uno de los cuales codifica una secuencia de proteína o ARN. Los genes se estudian para aprender sobre la estructura y función biológica, la evolución, las enfermedades y muchos otros aspectos de los sistemas vivos. Para estudiar los genes en detalle, el ADN debe ser aislado y purificado de las células de interés.
Extracción de ADN
Aunque se puede extraer y estudiar el ADN de una sola célula, no es suficiente ver a simple vista. para obtener una cantidad suficiente para poner en cola, cuantas más celdas tenga que trabajar, mejor (muchos millones).
Los protocolos exactos varían considerablemente para tener en cuenta las características únicas de muestras específicas, pero los pasos generales son homogeneización, lisis, digestión, separación y recolección. el procedimiento se realiza mejor en un tubo de plástico o vidrio pequeño (dependiendo del tamaño de la muestra).
una muestra generalmente se mezcla o se muele para separar completamente las células entre sí. Esto hace que los ingredientes celulares sean más accesibles a los reactivos que siguen. Luego se agregan detergente o enzimas al homogeneizado para lisar las membranas celulares (y las membranas nucleares si las células son eucariotas) para liberar el ADN. en este punto, el ADN está rodeado de proteínas, lípidos, carbohidratos, todo lo demás que estaba contenido en las células.
Una digestión enzimática adicional puede ser necesaria para descomponer las proteínas para que no se unan al ADN e interfieran con su recolección. El ADN se separa del resto del contenido celular al agregar alcohol frío, puro, etílico o isopropílico. El ADN no es soluble en estos alcoholes, por lo que se condensará para intentar minimizar su contacto con el alcohol. el ADN condensado se recolecta, generalmente por centrifugación o enrollado.
enrollado de ADN
la recolección de ADN mediante enrollado es efectiva cuando se obtiene una gran cantidad de ADN de un procedimiento de extracción. También es un excelente método de demostración, ya que es claramente visible una impresionante maraña de ADN puro.
Para enrollar el ADN, el paso de separación debe realizarse con cuidado. Si no formaba parte de la mezcla de reactivos de lisis agregada previamente, se debe agregar una solución de sal concentrada (cloruro de sodio) a la solución antes de la etapa de adición de alcohol. El alcohol frío se vierte lentamente por el lado del tubo de ensayo para formar una capa sobre la solución acuosa, evitando la mezcla. si se hace correctamente, el alcohol formará su propia capa sobre la capa salada. luego viene el spooling.
para recoger el ADN de la capa salada, coloque con cuidado una varilla de vidrio para remover la capa de alcohol hasta que toque el fondo del tubo. gire lentamente la varilla entre los dedos, mientras observa la interfaz entre las dos capas. si hay suficiente ADN presente, se agrupará en la interfaz entre las capas para formar una masa translúcida lechosa. Gire la varilla para envolver el ADN a su alrededor (esa es la parte de enrollar) y sáquela del tubo. El ADN se puede transferir a otro tubo de alcohol puro para su almacenamiento o análisis posterior.