Cómo preparar la solución salina tamponada con fosfato
pbs o solución salina tamponada con fosfato es una solución tampón que es particularmente valiosa porque imita la concentración de iones, la osmolaridad y el ph de los fluidos corporales humanos. en otras palabras, es isotónico para las soluciones humanas, por lo que es menos probable que cause daño celular, toxicidad o precipitación no deseada en investigaciones biológicas, médicas o bioquímicas.
composición química de pbs
Hay varias recetas para preparar la solución de pbs. La solución esencial contiene agua, hidrógeno fosfato de sodio y cloruro de sodio . Algunas preparaciones contienen cloruro de potasio y dihidrógeno fosfato de potasio. edta también se puede agregar en la preparación celular para evitar la aglomeración.
La solución salina tamponada con fosfato no es ideal para usar en soluciones que contienen cationes divalentes (fe 2+ , zn 2+ ) porque puede producirse precipitación. sin embargo, algunas soluciones de pbs contienen calcio o magnesio. Además, tenga en cuenta que el fosfato puede inhibir las reacciones enzimáticas. Tenga especial cuidado con esta desventaja potencial cuando trabaje con ADN. Si bien pbs es excelente para la ciencia fisiológica, tenga en cuenta que el fosfato en una muestra tamponada con pbs puede precipitarse si la muestra se mezcla con etanol.
una composición química típica de 1x pbs tiene una concentración final de 10 mm po 4 3− , 137 mm nacl y 2.7 mm kcl. Aquí está la concentración final de reactivos en la solución:
| sal | concentración (mmol / l) | concentración (g / l) |
|---|---|---|
| nacl | 137 | 8.0 |
| kcl | 2.7 | 0.2 0.2 |
| na 2 hpo 4 | 10 | 1,42 |
| kh 2 po 4 | 1,8 | 0.24 |
protocolo para hacer solución salina tamponada con fosfato
dependiendo de su propósito, puede preparar 1x, 5x o 10x pbs. muchas personas simplemente compran tabletas de tampón pbs, las disuelven en agua destilada y ajustan el pH según sea necesario con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio . Sin embargo, es fácil hacer la solución desde cero. Aquí hay recetas para 1x y 10x solución salina tamponada con fosfato:
reactivo | cantidad agregar (1 ×) | concentración final (1 ×) | cantidad para agregar (10 ×) | concentración final (10 ×) |
| nacl | 8 g | 137 mm | 80 g | 1,37 m |
| kcl | 0,2 g | 2,7 mm | 2 g | 27 mm |
| na2hpo4 | 1,44 g | 10 mm | 14,4 g | 100 mm |
| kh2po4 | 0,24 g | 1,8 mm | 2,4 g | 18 mm |
Opcional: | ||||
| cacl2 • 2h2o | 0,133 g | 1 mm | 1,33 g | 10 mm |
mgcl2 • 6h2o | 0,10 g | 0,5 mm | 1,0 g | 5 mm |
- Disuelva las sales reactivas en 800 ml de agua destilada.
- ajustar el ph al nivel deseado con ácido clorhídrico. generalmente esto es 7.4 o 7.2. use un medidor de ph para medir el ph, no el papel ph u otra técnica imprecisa.
- agregue agua destilada para lograr un volumen final de 1 litro.
esterilización y almacenamiento de solución de pbs
la esterilización no es necesaria para algunas aplicaciones, pero si la está esterilizando, dispense la solución en alícuotas y esterilice en autoclave durante 20 minutos a 15 psi (1.05 kg / cm 2 ) o use esterilización con filtro.
La solución salina tamponada con fosfato puede almacenarse a temperatura ambiente . También puede refrigerarse, pero la solución 5x y 10x puede precipitar cuando se enfría . Si debe enfriar una solución concentrada, primero almacénela a temperatura ambiente hasta que esté seguro de que las sales se han disuelto por completo. Si se produce precipitación, el calentamiento de la temperatura los devolverá a la solución. La vida útil de la solución refrigerada es de 1 mes.
diluir una solución 10x para hacer 1x pbs
10x es una solución concentrada o de reserva, que puede diluirse para obtener una solución 1x o normal. una solución 5x debe diluirse 5 veces para hacer una dilución normal, mientras que una solución 10x debe diluirse 10 veces.
Para preparar una solución de trabajo de 1 litro de 1x pbs de una solución de 10x pbs, agregue 100 ml de la solución de 10x a 900 ml de agua. esto solo cambia la concentración de la solución, no el gramo o la cantidad molar de los reactivos. El ph no debe verse afectado.
pbs versus dpbs
otra solución tampón popular es la solución salina tamponada con fosfato de dulbecco o dpbs. dpbs, como pbs, se usa para investigación biológica y amortiguadores en el rango de 7,2 a 7,6 ph. Se puede almacenar a temperatura ambiente. La solución de dulbecco contiene una concentración más baja de fosfato. es de iones de fosfato de 8,1 mm mm, mientras que los pbs regulares son de fosfato de 10 mm. la receta para 1x dpbs es:
| reactivo | cantidad para agregar (1x) |
| nacl | 8,007 g |
| kcl | 0,201 g |
| na 2 hpo 4 | 1.150 g |
| kh 2 po 4 | 0.200 g |
| Opcional: | |
| cacl 2 • 2h 2 o | 0,133 g |
| mgcl 2 • 6h 2 o | 0,102 g |
disolver las sales en 800 ml de agua. ajustar ph a 7.2 a 76 usando ácido clorhídrico. ajustar el volumen final a 1000 ml con agua. autoclave a 121 ° C durante 20 minutos.
fuentes
- dulbecco, r .; et al. (1954) " formación de placa y aislamiento de líneas puras con virus de poliomielitis ". j. Exp. medicina 99 (2): 167-182.
- "solución salina tamponada con fosfato (pbs." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laborator Press.