Soluci贸n salina o PBS tamponada con fosfato

Soluci贸n salina o PBS tamponada con fosfato

C贸mo preparar la soluci贸n salina tamponada con fosfato

pbs o soluci贸n salina tamponada con fosfato es una soluci贸n tamp贸n que es particularmente valiosa porque imita la concentraci贸n de iones, la osmolaridad y el ph de los fluidos corporales humanos. En otras palabras, es isot贸nico para las soluciones humanas, por lo que es menos probable que cause da帽o celular, toxicidad o precipitaci贸n no deseada en investigaciones biol贸gicas, m茅dicas o bioqu铆micas.

composici贸n qu铆mica de pbs

Hay varias recetas para preparar la soluci贸n de pbs. La soluci贸n esencial contiene agua, hidr贸geno fosfato de sodio y cloruro de sodio . Algunas preparaciones contienen cloruro de potasio y dihidr贸geno fosfato de potasio. Edta tambi茅n se puede agregar en la preparaci贸n celular para evitar la aglomeraci贸n.

La soluci贸n salina tamponada con fosfato no es ideal para usar en soluciones que contienen cationes divalentes (fe 2+ , zn 2+ ) porque puede producirse precipitaci贸n. Sin embargo, algunas soluciones de pbs contienen calcio o magnesio. Adem谩s, tenga en cuenta que el fosfato puede inhibir las reacciones enzim谩ticas. Tenga especial cuidado con esta desventaja potencial cuando trabaje con ADN. Si bien pbs es excelente para la ciencia fisiol贸gica, tenga en cuenta que el fosfato en una muestra tamponada con pbs puede precipitarse si la muestra se mezcla con etanol.

una composici贸n qu铆mica t铆pica de 1x pbs tiene una concentraci贸n final de 10 mm po 4 3鈭 , 137 mm nacl y 2.7 mm kcl. Aqu铆 est谩 la concentraci贸n final de reactivos en la soluci贸n:

salconcentraci贸n (mmol / l)concentraci贸n (g / l)
nacl1378.0
kcl2.70.2 0.2
na 2 hpo 4101,42
kh 2 po 41,80.24

protocolo para hacer soluci贸n salina tamponada con fosfato

dependiendo de su prop贸sito, puede preparar 1x, 5x o 10x pbs. Muchas personas simplemente compran tabletas de tamp贸n pbs, las disuelven en agua destilada y ajustan el pH seg煤n sea necesario con 谩cido clorh铆drico o hidr贸xido de sodio . Sin embargo, es f谩cil hacer la soluci贸n desde cero. Aqu铆 hay recetas para 1x y 10x soluci贸n salina tamponada con fosfato:

reactivo

cantidad

agregar (1 脳)

concentraci贸n final (1 脳)

cantidad para agregar (10 脳)

concentraci贸n final (10 脳)

nacl

鈥冣 8 g

137 mm

鈥80 g

鈥1,37 m

kcl

鈥0,2 g

2,7 mm

鈥 鈥2 g

27 mm
na2hpo4

鈥1,44 g

10 mm

14,4 g

100 mm

kh2po4

鈥0,24 g

1,8 mm

鈥2,4 g

18 mm

Opcional:

cacl2 鈥 2h2o

0,133 g

1 mm

1,33 g

10 mm

mgcl2 鈥 6h2o

0,10 g

0,5 mm

1,0 g

鈥5 mm

  1. Disuelva las sales reactivas en 800 ml de agua destilada.
  2. ajustar el ph al nivel deseado con 谩cido clorh铆drico. Generalmente esto es 7.4 o 7.2. Use un medidor de ph para medir el ph, no el papel ph u otra t茅cnica imprecisa.
  3. agregue agua destilada para lograr un volumen final de 1 litro.

esterilizaci贸n y almacenamiento de soluci贸n de pbs

la esterilizaci贸n no es necesaria para algunas aplicaciones, pero si la est谩 esterilizando, dispense la soluci贸n en al铆cuotas y esterilice en autoclave durante 20 minutos a 15 psi (1.05 kg / cm 2 ) o use esterilizaci贸n con filtro.

La soluci贸n salina tamponada con fosfato puede almacenarse a temperatura ambiente . Tambi茅n puede refrigerarse, pero la soluci贸n 5x y 10x puede precipitar cuando se enfr铆a . Si debe enfriar una soluci贸n concentrada, primero almac茅nela a temperatura ambiente hasta que est茅 seguro de que las sales se han disuelto por completo. Si se produce precipitaci贸n, el calentamiento de la temperatura los devolver谩 a la soluci贸n. La vida 煤til de la soluci贸n refrigerada es de 1 mes.

diluir una soluci贸n 10x para hacer 1x pbs

10x es una soluci贸n concentrada o de reserva, que puede diluirse para obtener una soluci贸n 1x o normal. Una soluci贸n 5x debe diluirse 5 veces para hacer una diluci贸n normal, mientras que una soluci贸n 10x debe diluirse 10 veces.

Para preparar una soluci贸n de trabajo de 1 litro de 1x pbs de una soluci贸n de 10x pbs, agregue 100 ml de la soluci贸n de 10x a 900 ml de agua. Esto solo cambia la concentraci贸n de la soluci贸n, no el gramo o la cantidad molar de los reactivos. El ph no debe verse afectado. 

pbs versus dpbs

otra soluci贸n tamp贸n popular es la soluci贸n salina tamponada con fosfato de dulbecco o dpbs. Dpbs, como pbs, se usa para investigaci贸n biol贸gica y amortiguadores en el rango de 7,2 a 7,6 ph. Se puede almacenar a temperatura ambiente. La soluci贸n de dulbecco contiene una concentraci贸n m谩s baja de fosfato. Es de iones de fosfato de 8,1 mm mm, mientras que los pbs regulares son de fosfato de 10 mm. La receta para 1x dpbs es:

reactivocantidad para agregar (1x)
nacl8,007 g
kcl0,201 g
na 2 hpo 41.150 g
kh 2 po 40.200 g
Opcional:
cacl 2 鈥 2h 2 o0,133 g
mgcl 2 鈥 6h 2 o0,102 g

disolver las sales en 800 ml de agua. Ajustar ph a 7.2 a 76 usando 谩cido clorh铆drico. Ajustar el volumen final a 1000 ml con agua. Autoclave a 121 掳 C durante 20 minutos.

fuentes

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