Ventajas y desventajas de Western Blot

Ventajas y desventajas de Western Blot

Western Blot, una t√©cnica anal√≠tica utilizada para identificar una prote√≠na espec√≠fica en una muestra dada, emplea la capacidad de una enzima o anticuerpo primario marcado con fluorescencia para unirse a su ant√≠geno espec√≠fico. Es un proceso de tres pasos que comienza con electroforesis en gel, seguido de transferencia de membrana y sondeo con anticuerpos. la detecci√≥n de prote√≠nas puede ser directa o indirecta, utilizando este √ļltimo un anticuerpo secundario marcado dirigido contra el primario. Aunque se acepta como una t√©cnica de an√°lisis de prote√≠nas de rutina, el Western blot tiene tanto limitaciones como beneficios.

ventaja: sensibilidad

Uno de los mayores argumentos a favor de Western Blot es su sensibilidad. Debido a su capacidad para detectar tan solo 0.1 nanogramos de prote√≠na en una muestra, la t√©cnica puede servir te√≥ricamente como una herramienta de diagn√≥stico temprano eficaz, detectando incluso la respuesta inmunog√©nica m√°s leve de un virus o bacteria en una muestra de paciente. una transferencia Western indirecta se basa en esta sensibilidad a partir de la capacidad del anticuerpo secundario para amplificar la intensidad de la se√Īal detectada por el sistema de im√°genes. una mayor sensibilidad significa que se necesitan menos anticuerpos para las pruebas, lo que reduce significativamente los costos de laboratorio.

ventaja: especificidad

La t√©cnica de Western Blot debe su especificidad a dos grandes factores contribuyentes. Primero, la electroforesis en gel clasifica una muestra en prote√≠nas de diferente tama√Īo, carga y conformaci√≥n. este proceso en s√≠ mismo es un gran paso hacia la detecci√≥n, ya que las bandas formadas en el gel ya dan pistas sobre el tama√Īo de la prote√≠na o polip√©ptido de inter√©s. La especificidad de la interacci√≥n anticuerpo-ant√≠geno sirve como el segundo gran factor. Debido a que los anticuerpos espec√≠ficos muestran afinidad por prote√≠nas espec√≠ficas, el proceso puede detectar selectivamente una prote√≠na objetivo incluso en una mezcla de 300,000 prote√≠nas diferentes.

Desventaja: propenso a resultados falsos o subjetivos.

a pesar de su sensibilidad y especificidad, un western blot todav√≠a puede producir resultados err√≥neos. un resultado falso positivo cuando un anticuerpo reacciona con una prote√≠na no intencionada, que es lo que sucede con frecuencia cuando un paciente que se realiza una prueba de detecci√≥n del VIH tiene tuberculosis o una serie de infecciones parasitarias. un falso negativo, por otro lado, puede resultar f√°cilmente si las prote√≠nas m√°s grandes no tienen suficiente tiempo para transferirse adecuadamente a la membrana. la transferencia y el procesamiento incorrectos a menudo producen bandas sesgadas, descoloridas o incluso m√ļltiples, lo que hace que los resultados de las pruebas est√©n sujetos a la interpretaci√≥n del t√©cnico.

Desventaja: alto coste y demanda técnica.

El costo de un Western Blot es un compuesto de los grandes gastos individuales para anticuerpos marcados, analistas expertos y equipo de laboratorio. un proceso delicado, la transferencia Western requiere precisi√≥n en cada paso para la identificaci√≥n adecuada de los constituyentes de una muestra. un error menor en la concentraci√≥n de reactivo o en el per√≠odo de incubaci√≥n puede ser desastroso para todo el proceso. Por √ļltimo, el equipo requerido para la detecci√≥n y la obtenci√≥n de im√°genes (quimioluminiscentes, fluorescentes, radiactivos o sistemas de detecci√≥n por l√°ser) puede ser demasiado costoso para la unidad de microbiolog√≠a promedio.



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