La electroforesis en gel es un método utilizado en laboratorios para medir y clasificar hebras de ADN. es necesario porque el ADN en condiciones normales es demasiado pequeño para manipularlo, incluso cuando se ve con la mayoría de los microscopios. El laboratorio de electroforesis en gel utiliza un procedimiento relativamente sencillo, y la misma técnica básica también se puede usar para separar proteínas individuales.
la matriz de gel
para comenzar el procedimiento de electroforesis en gel, primero debe crear el gel. Por lo general, los geles se fabrican en láminas delgadas con una sustancia llamada agarosa. La agarosa en polvo se coloca en un matraz, seguida de una solución de agua salada llamada tampón. esta mezcla de agarosa y tampón se calienta hasta que las dos sustancias se funden y luego se vierten en un molde de formación. un dispositivo llamado peine se coloca en un extremo del molde antes de que el gel se enfríe. cuando se enfría el gel, se retira el peine, dejando pequeñas ranuras que se utilizarán para contener muestras de ADN.
una característica especial de la mezcla de agarosa enfriada (llamada matriz de gel) se deriva del hecho de que se crea con agua salada. cuando se electrifique, la matriz se volverá conductora, permitiendo que la electricidad fluya a lo largo de su longitud. Otra propiedad especial de la matriz de gel es la presencia de agujeros microscópicos regulares. estos orificios permitirán que las hebras de ADN se desplacen a través de la matriz de gel y faciliten el proceso de clasificación.
la cámara de electroforesis
Su próximo paso es crear una cámara de electroforesis. esta es una pequeña caja rectangular, conectada con una conexión eléctrica positiva y negativa en cada extremo. Las cámaras suelen ser poco profundas, lo suficientemente pequeñas como para caber sobre una mesa, y construidas con materiales transparentes como plexiglás.
La solución de agua salada se vierte en el fondo de la cámara de electroforesis y la matriz de gel se sumerge ligeramente dentro de esta solución. El agua salada sirve para dos propósitos: ayudar al flujo de electricidad y mantener la matriz de gel húmeda. Como el ADN es propulsado por una carga negativa, coloque su matriz de modo que sus muestras se encuentren al lado de su conexión eléctrica negativa.
preparando el ADN
Luego se preparan muestras de ADN. Dado que el ADN en la solución es casi imposible de ver, se agrega un agente colorante llamado tampón de carga a cada muestra individual. este agente también espesa la solución de ADN, haciéndola menos líquida y más viable. con una pipeta, transfiera una muestra de solución de ADN a cada ranura alternativa en la matriz de gel. en la ranura vacía entre cada muestra, coloque alguna solución de ADN cuya longitud ya sepa (llamada norma de ADN) para el control y la comparación de experimentos.
conectar la alimentación
Ahora, enciende tu cámara de electroforesis. bajo potencia negativa, sus muestras de ADN serán forzadas a lo largo de la cámara. pequeñas hebras de ADN se moverán más rápidamente a través de la matriz de gel, y en un corto período de tiempo se separarán de hebras más largas y lentas. El tinte en el agente colorante te permite seguir la pista del ADN. no podrá ver hebras individuales de ADN, pero las hebras de la misma longitud se agruparán.
pasos finales
cuando el ADN se resuelve, la matriz se retira de la cámara de electroforesis. Luego, el ADN se tiñe para permitir una medición y un examen más fáciles.