Cómo calcular la cantidad de bacterias presentes

Cómo calcular la cantidad de bacterias presentes

los científicos usan diluciones en serie (una serie de diluciones 1:10) para calcular la densidad de población de los cultivos bacterianos. cuando una gota de cultivo que contiene un pequeño número de bacterias se coloca en placas e incuba, cada célula teóricamente estará lo suficientemente lejos de otras células como para formar su propia colonia. (en realidad, algunas colonias pueden ser descendientes de dos células cercanas, pero esto es raro en cultivos diluidos, por lo que el número de colonias es una muy buena estimación del número de células transferidas originalmente a la placa) porque la densidad de población es desconocido, se debe usar una variedad de diluciones para terminar con una placa con un número apropiado de colonias.

diluciones seriales

    etiquetar los seis tubos de ensayo (cada uno con 9 ml de medio de crecimiento) como 1 a 6. etiquetar las seis placas de agar como 1 a 6. usar una pipeta y puntas de pipeta estériles de 1 mililitro (ml) para transferir 1 ml de cultivo bacteriano al tubo 1.

    mezcle bien y transfiera 1 ml del tubo 1 al tubo 2 usando una pipeta y puntas estériles de 1 ml.

    repita el paso 2 para los tubos restantes, cada vez que transfiera 1 ml del tubo usado más recientemente al siguiente tubo.

    use una pipeta y puntas estériles de 0,1 ml para transferir 0,1 ml del tubo 1 a una placa de agar. flamee una varilla de vidrio en forma de l y utilícela para extender la gota uniformemente alrededor de la placa. Incube la placa durante 48 horas a una temperatura adecuada para las bacterias que se utilizan. Diferentes tipos de bacterias tienen diferentes temperaturas óptimas de crecimiento. Si no puede encontrar la temperatura de crecimiento óptima utilizando material de referencia, intente incubar las placas a 25 y 37 grados.

    repita el paso 4, cada vez que transfiera líquido de un tubo de ensayo diferente a su placa correspondiente.

cálculos de población

    Observe las seis placas y elija la que tenga entre 30 y 200 colonias aisladas.

    multiplique el número de colonias en la placa por 10 para calcular el número de células por ml de cultivo del tubo de dilución utilizado.

    multiplique el número del paso 2 por 10 ^ (número de placa) para calcular el número de células por ml de cultivo original. el valor de 10 ^ (número de placa) es el factor de dilución del cultivo utilizado para inocular esa placa.

    propina

    Incluir todos los nutrientes requeridos en las placas de agar. Las bacterias auxotróficas requieren ciertos aminoácidos además de los ingredientes básicos de los medios. Los diferentes auxótrofos tienen diferentes requerimientos de nutrientes. Consulte el material de referencia para averiguar qué aminoácidos, si los hay, necesitan sus bacterias.

    Espere un segundo entre flamear la varilla de vidrio y usarla, para no quemar las bacterias.

    advertencia

    Siempre use guantes de laboratorio cuando maneje bacterias.



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